طرز تهیه PDA

سیب زمینی را در یک لیتر آب به مدت یک ساعت بجوشانید.سپس

سیب زمینی را آبکش کنید بعد آب سیب زمینی بدست آمده را بهمراه

مقدار مشخص شده آگار وشکر و مخمرآبجو درون یک کاسه ریخته

وبطور کامل مخلوط کنید .سعی کنید آنرا با یک همزن دستی سیمی

با دقت به هم بزنید ولی توصیه میشود عمل مخلوط را به صورت

زدن انجام ندهید

سپس نصف مخلوط را درون هر کدام از دو بطری بریزید البته

فقط به اندازه یک دوم حجم بطری ها را پر کنید بعد دهانه بطریها

را با پنبه ببندید وسپس روی آنرا با یک فویل آلومینیوم بپوشانید

آنگاه بطریها درون زودپز بر روی جایگاهی که از قبل برای اینکار

درنظر گرفته ائید قرار دهید ومقداری آب درون زودپز بریزید

سپس درپوش زودپز را ببندید واجاق گاز را روشن کنید وبه

مدت 15دقیقه و در فشار 15 PSIو120 درجه سانتیگراد بپزید.

بعد از مدت15 دقیقه اجاق گاز را خاموش کنید واجازه دهید فشار

بتدریج به حالت عادی درآید(حدود45 دقیقه طول خواهد کشید)

و در این اثنا درپوش لوله ها را بردارید ولوله ها را بر روی قفسه

مخصوص قرار دهید وبا یک حرکت دورانی آرام باعث شوید محتوی بطری به طور کامل مخلوط گردد.

سپس فویل وپنبه را از سر آنها بردارید حال لوله های آزمایش را تا

حدود یک سوم ظرفیتشان پر کنید درپوش لوله ها را شل ببندید

سپس جایگاه حلبی لوله های آزمایش را در زودپز قرار دهید

فشار را 15psi و120 درجه سانتیگراد برسانید و برای 30 دقیقه

بگذارید تا بپزد بعد از آن دوباره اجازه دهید زودپز به تدریج خنک

شود تا فشار به حالت عادی برگردد. جایگاه حلبی لوله ها را

بردارید ودر پوش لوله ها را محکم ببندید و سفت کنید

حال لوله ها یا جایگاه محتوی لوله ها را به صورت زاویه دار به

یکطرف کج کنید تا سطح محتوی لوله ها به صورت مایل وشیبدار

درآید پیشنهاد میگردد که سطح مایل بودن هر چه بیشتر باشد.

این روش به روش ”SLANTS“ منسوب است.

هنگامی که محتویات محیط کشت سرد میشود شروع به سفت شدن

می نماید وبه صورت ماده ژلاتینی در می آید.

اگر لوله ها فورا استفاده نشوند آنها را می توان درون کیسه های

زیپ دار در یخچال برای هفته ها تا ماه ها نگهداری کرد.

تکنیک محیط کشت استریل

مواد مورد مورد نیاز:

uتیغ جراحی( اسکاپل)

uچراغ الکلی یا شمعک گازی

uشانه نگهداری لوله های“کج شده“

uمحل نگهداری تیغ جراحی

uنوار متخلخل ریز

uاسپری ضدعفونی کننده کلراین با غلظت10%

uمیوه قارچ از هر نوع که تمایل دارید برای تازه کارها قارچ صدفی پیشنهاد می شود

محلی در خانه آزمایشگاه و یا دفترکارتان انتخاب کنید به طوری که

تا جایی که ممکن است عاری از گرد وغبار وکپک باشد.میزکاررا

با آب گرم وصابون بشویید وخشک کنید.با همان محلول10%کلر

میز ومحل کار را قبل از شروع کار اسپری و ضدعفونی و سپس

خشک کنید. پنجره ها را ببندید جریان هوا را مسدود کنید.

بهترین شرایط برای شروع فعالیت کاشت قارچ صبح زود است که

گرد وغبار ناشی از فعالیتهای روزانه خانه وجود ندارد.

تمام مواد مورد نیاز را در دسترس وآماده بگذارید و لوله آزمایش

را در جای خودشان قرار دهید چراغ الکلی را روشن کنید

تیغه جراحی را در میان شعله استریلیزه کنید .

با یک میوه قارچ تازه وتمیز شروع کنید .سطح خارجی قارچ احتمالا به باکتری ویا کپک ممکن است آلوده باشد.

اما لایه های داخلی قارچ معمولا آلوده نیستند تکه ای از قارچ شکسته وآنرا بر روی میز بگذارید بطوریکه سطح تمیز آن

به سمت کنار باشد وبا سطح میز تماس حاصل نکند.

هدف آن است که قطعه بسیار کوچک از لایه داخلی از میوه قارچ

برداشته شود و تا آنجا که ممکن است تمیز به لوله کشت منتقل شود.

اکنون شما باید تمام مواد مورد نیاز را بخوبی مرتب وفراهم کنید.

چنانچه وقتی لوله ها را باز می کنید کمترین زمان درمعرض آلودگی قرار گیرد.